1. Nestbau
Virginia-Uhus bauen Nester typischerweise in hohen Bäumen, nutzen aber auch alte Nester anderer Vögel oder Felsspalten. Das Weibchen baut den Großteil, das Männchen bringt Material (Zweige, Äste, Blätter). Das Nest wird mit weichem Material (Moos, Federn, Gras) ausgepolstert.
2. Eiablage und Brut
Virginia-Uhus legen 1–5 Eier (meist 2–4). Eier sind weiß, fast kugelförmig. Das Weibchen brütet ca. 35 Tage. In dieser Zeit versorgt das Männchen sie mit Nahrung und bewacht das Nest.
3. Schlüpfen und Aufzucht
Die Küken schlüpfen asynchron (über mehrere Tage verteilt). Das erstgeschlüpfte („Erstgeborene“) ist meist größer und stärker. Die altricialen Küken sind hilflos und abhängig von den Eltern für Nahrung und Schutz. Das Weibchen hudert die Küken die ersten Wochen, das Männchen bringt weiter Futter.
4. Fütterung
Virginia-Uhus sind Fleischfresser: hauptsächlich Kleinsäuger (Mäuse, Wühlmäuse, Kaninchen), auch Vögel, Fische, Insekten. Das Männchen jagt meist, das Weibchen füttert die Küken mit gewürgtem Futter (kleine Fleisch- und Knochenstücke).
5. Ausfliegen
Küken beginnen mit ca. 8 Wochen zu fliegen (ausfliegen). Sie sind noch monatelang nach dem Ausfliegen von den Eltern für Nahrung abhängig. Sie lernen Jagen durch Beobachtung und eigene Übung.
6. Abwanderung
Sind die Jungvögel vollständig unabhängig, verlassen sie das Elterneinzugsgebiet und gründen eigene Reviere. Virginia-Uhus sind reviertreu und meist lebenslang monogam.